本發明公開了一種香菇菌種保藏培養基，由下列原料組成：酵母浸粉、蛋白胨、楊木屑、氯化鈉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、葡萄籽提取物、L‑脯氨酸、硒代半胱氨酸、甜菜堿、調環酸鈣、水楊酸、果糖‑1，6‑二磷酸、海藻糖、醇類，余量為純凈水。同時本發明還公開了一種香菇菌種保藏方法，將待保藏的香菇菌種培養出菌絲體后，打孔接入菌種保藏培養基中，密封后置于冰箱低溫保藏。本發明能夠實現香菇菌種的穩定保存，菌種變異或退化程度極小，存活率高，保藏效果好。本發明操作簡便，無需定期移植，降低了污染的風險；對保藏設備要求不高，節約了生產成本，具有很高的實用價值。